外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對(duì)相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能。作為細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍,但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù),關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多。例如,外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì),給后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了許多障礙??贵w親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體,無(wú)法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法(WB)和Elisa檢測(cè)法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測(cè)的一般方法,又存在檢測(cè)時(shí)需使用大量外泌體和難以檢測(cè)到低表達(dá)水平的標(biāo)記蛋白。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對(duì)受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來(lái)源來(lái)區(qū)分。廣州體液外泌體
NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,用激光光束穿過樣本,激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng),實(shí)現(xiàn)顆??梢暬H缓笫褂肧tokes-Einstein方程來(lái)測(cè)量粒子的平均速度,繼而估算粒子的大小。NTA能夠測(cè)量粒徑10-1000nm之間的顆粒,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),另外,NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體,因此無(wú)法排除其他物質(zhì)干擾。外泌體亞型隨著今后的研究發(fā)展,外泌體功能逐步清晰,并擴(kuò)大臨床應(yīng)用。
在免疫系統(tǒng)中,淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等均可以產(chǎn)生外泌體。研究表明免疫細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠明顯影響機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,包括調(diào)節(jié)抗原呈遞、免疫激huo、免疫監(jiān)督等。不同免疫細(xì)胞來(lái)源的外泌體功能不同,以樹突狀細(xì)胞(該細(xì)胞具有免疫刺激能力,是目前能夠激huo初始T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞)來(lái)源的外泌體為例,其外泌體的免疫刺激作用取決于來(lái)源細(xì)胞的成熟狀態(tài)。成熟的樹突狀細(xì)胞外泌體內(nèi)包含能夠直接激huoT細(xì)胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ,共刺激分子如CD40、CD8、CD86和熱激蛋白,這些分子使樹突狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體具有抗原呈遞、調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的生物功能。
外泌體的相關(guān)成分:1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流動(dòng),參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同時(shí)還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進(jìn)行主動(dòng)包埋。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。外泌體在心臟修復(fù)中起著關(guān)鍵作用。
外泌體調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能,延長(zhǎng)毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)期,同時(shí)活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊,使其提前進(jìn)入新的生長(zhǎng)周期,實(shí)現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長(zhǎng)。骨衰老小鼠注射外泌體試驗(yàn)證明:年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機(jī)。來(lái)源于脂肪組織中的干細(xì)胞分泌一些信號(hào)分子和生長(zhǎng)因子,可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)周期的毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞進(jìn)行分化,向上遷移生成表皮細(xì)胞和皮脂腺,向下遷移生成毛母細(xì)胞。毛發(fā)根部的囊的生長(zhǎng)周期決定毛發(fā)的生長(zhǎng)周期,而毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度,外泌體靶向調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的功能。外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)。杭州外泌體脂質(zhì)組學(xué)
不同類別的外泌體囊泡有三個(gè)征:表面具涂層的膜泡、內(nèi)含纖維的膜泡、電子致密囊泡。廣州體液外泌體
為獲得外泌體的大小、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息,可以通過電鏡、動(dòng)態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細(xì)胞儀等對(duì)外泌體進(jìn)行表征。通過電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息,不同類型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同,得到的外泌體形態(tài)存在差異。例如,在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中,外泌體呈現(xiàn)囊泡獨(dú)有的茶托形,可能由于樣品在固定或染色過程中極度脫水,導(dǎo)致外泌體塌陷所致。與之相反,在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形,由于不會(huì)脫水變性,所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實(shí)狀態(tài)。另外,由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率,也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息。廣州體液外泌體
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